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    安捷倫Seahorse XF糖酵解壓力測試實驗結果解析

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    安捷倫Seahorse XF糖酵解壓力測試可以直接測量細胞外酸化速率 (ECAR)來評估活細胞糖酵解相對功能,可以獲得全面評估糖酵解通路的關鍵參數,包括:糖酵解、糖酵解能力、糖酵解儲備和非糖酵解的酸化。

    實驗簡介:

    細胞在無葡萄糖和丙酮酸的糖酵解壓力測試檢測液中孵育,并測量ECAR獲得非糖酵解酸化速率。然后,細胞利用實時加入的葡萄糖并通過糖酵解通路將其分解成丙酮酸,產生ATP、NADH、水和質子。質子排出到周圍溶液中引起 ECAR快速增加,這種葡萄糖誘導的反應被稱為基礎條件下的糖酵解速率。再實時加入ATP合酶的抑制劑寡霉素(Oligomycin),可抑制線粒體ATP產生,從而將能量產生轉移至糖酵解通路,引起ECAR進一步升高,反映了細胞最大的糖酵解能力。最后加入2-脫氧葡萄糖(2-deoxy-glucose, 2-DG),該藥通過競爭性結合糖酵解途徑的己糖激酶而抑制糖酵解,引起ECAR降低從而證實實驗中 ECAR的產生來源于糖酵解途徑。

    實驗結果意義:

    糖酵解:葡萄糖轉變成丙酮酸的過程,XF糖酵解壓力測試將糖酵解的測量表示為細胞加入飽和濃度的葡萄糖后所達到的ECAR 速率;

    糖酵解能力:測量的是加入寡霉素后細胞達到的最大ECAR速率,寡霉素有效關閉氧化磷酸化并驅使細胞利用糖酵解達到最大能力;

    糖酵解儲備:該測量表示細胞響應能量需求的能力及細胞糖酵解功能與理論最大值的接近程度;

    非糖酵解的酸化:測量其他來源的細胞外酸化,而不是來自糖酵解。

    實驗結果計算公式:

    Seahorse XF糖酵解壓力測試通過增加糖酵解活性來檢驗細胞對挑戰性條件做出反應的能力。與終點測定法(例如葡萄糖攝取或乳酸外排)相比,該測定法可在多種條件下提供每個檢測樣本糖酵解功能的讀數,從而獲得更豐富的數據。

    聲明:僅供研究使用,不用于診斷性操作。

    版權說明:版權歸原作者及安捷倫細胞團隊,本文內容部分來源于美國安捷倫科技公司官網(www.agilent.com)。如有問題請聯系小編,歡迎批評指正,衷心感謝!

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    2022年4月1日 15:04
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